克里斯托弗·伯吉斯和约翰·哈蒙德
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继续光谱学的系列文章中,我们将主要紫外可见区域的光谱,但这一次的科学发光(半岛综合体育官方APP下载德甲荧光和磷光光度法),在所有它的多种形式。给定的应用领域和仪器类型的多样性,在这样的一篇文章我们只能简要概述和感兴趣的话题,因此,建议后续上市参考更深入的讨论点。
发光测量并无不同对必要的数据质量比光谱测量之前进行了讨论。然而,正如我们将要看到的,它的基本原理和仪器因素,更复杂的比吸收测量和经常被遗忘或被忽视。更严重的是,他们甚至可能不被考虑当评估频谱或从一个试验获得的数量。访问文学更分散,记载远比不上吸收或发射光谱。这很奇怪,因为发光测量至少与吸收的。1不幸的是,标准的工作标准和荧光测量技术已经绝版多年。2此外,经典分析化学文本,例如大力士,3还没有更新。
主要是,由于这些原因在ASTM国际会员的要求,使用一个新的标准实践和排位赛荧光光谱仪ASTM签发4和IUPAC正在一系列类似的信息文件。
终于,一些国家计量研究院(敝中断)回应请求提供主要参考资料认证荧光测量。BAM(德国)产生了一系列可见染料定义特色商用和NIST(美国)增加,除了936年SRM硫酸奎宁的可用性,一系列metallic-doped眼镜相对强度校正标准。四个眼镜作为SRM提供2940年,2941年,2942年和2943年,橙色、绿色、紫外线和蓝色区域的光谱,分别。拥有这些材料可用,是允许二级生产商生产可追踪的引用,例如,硫酸奎宁,hi-purity sealed-cuvette格式的“拉曼”水等。
再一次,这些变化在特定领域需求的结果,需要定义问题找到解决方案。
仪器设计
1959年,南非引入了世界上第一个与光栅单色仪分光荧光计,在1970年代和1960年代,许多仪器的制造商提供产品今天推出了他们的第一个荧光仪器。作为第一个商业化扫描荧光谱仪,原AMINCO-Bowman荧光仪器在1950年代引发了一场革命。全民健康保险实施工作与他人,鲍曼博士在1955年开发了他的第一个原型荧光分光光度计。不同于以往荧光计,这种新的仪器能够改变激发光的波长以及测量发射荧光的强度和波长。这个工具可以用来调查生物化合物和帮助科学家找出新的方法来利用荧光研究的身体。因为激动人心的结果与原型,美国仪器公司(AMINCO)附近的银泉马里兰州美国营销感兴趣的新仪器。第一个AMINCO-Bowman防晒系数分析仪器在1956年匹兹堡会议上展出,和AMINCO-Bowmen名称一直持续到本世纪AB2。
不幸的是,像很多人一样,这个名字已经传递到历史和专业知识。
备案,这个革命光谱仪的光学图如图1所示。除了最明显的变化在电子、光学设计原理是今天仍在使用。随后,该技术进入了一个“安静”阶段,在使用荧光基本上是受到许多限制,要求发展的基本组件。1985年之前,大多数使用放射性标签进行DNA测序;然而,荧光探针的发展激发和发射波长较长的能力引入细胞,自发折叠和完全荧光蛋白的形成,彻底改变了科学和“开启”的复兴。夫妇与可用性的超快激光和适当的计算能力和你看到这项技术正在经历一场复兴的原因。
一个新的开发领域还包括不断扩大领域的纳米技术。如以下图片所示,可以制造,能发出荧光量子点在整个频谱。这些系统的独特属性,同时激发波长保持不变,发出“颜色”是由简单的变化点的大小。这种“tuneability”允许简单的彩色化验的发展。
这种增长的大小这一事实中可以看到,自2004年以来,主要科学出版社已经产生了年度荧光评估系列的目前的工作,虽然尚未发布“2008”卷。
尽可能多的相关物理仪器所需的设计是一样的,吸光紫外/可见/近红外光谱法,我们已经看到了技术扩大为类似地区使用简单的基于过滤器工具,micro-plate数组读者、光纤、显微镜甚至荧光版本的超低样品卷设备的资格仍然存在的问题。
仪器的资格
正如前面所讨论的那样,吸收光谱和资格的科学使用的仪器是相对简单和良好的文档记录,尽管在某些领域,参考资半岛综合体育官方APP下载德甲料的可用性是有限的,过程可能有点费时和费力。然而,在过程的结束,如果正确执行,光谱信息、方法论等可以比较和转移从一个环境到另一个地方。
目前,同样不能说发射的“表亲”-为什么,因为Lakowicz5只是“…与吸收测量相比,荧光强度测量是绝对的,不是相对的“。简单来说,基本比吸收测量消掉的理想行为来源、探测器等。然而,不幸的是,同样不能说一代的发射光谱(相对光子强度和波长),即使他们出现类似的“纸”。
因此,为了获得一个真正的“纠正”发射光谱,理想荧光谱仪将包含:
- 一个光源产生一个恒定的所有波长的光子输出;
- 单色仪,通过光子的波长等于效率;
- 单色器的效率是影响两极分化;
- 探测器的响应函数是独立的波长;
没有身体上是可能的。
因此,在现实中,资格的荧光谱仪的过程需要建立源和探测器的实际响应函数和相关的因素,例如,线性,直接或间接,然后应用适当的修正。此外,仪器仍从根本上光谱仪,所以波长精度的参数和谱狭缝宽度必须是合格的,在日常生活中,波长和强度尺度验证。
一旦你有合格的仪器,还有一系列method-specific参数你可以/可能没有验证。其中很多是公认良好的光谱实践要求,比如定量范围和检测极限和敏感,但同样,发射光谱学添加chromophore-specific参数的“一生”,量子产率”和“各向异性”。半岛综合体育官方APP下载德甲
此外,荧光技术增加了许多证据确凿的微环境的影响,如“淬火”、“Inter-filter效应”,pH值、溶剂等。幸运的是,许多现代monochromator-based、软件控制系统现在将光谱校正算法和性能验证协议纳入自己的系统。
因此,在结论中,荧光光谱是一个极其敏感和强大的分析技术,特别是用于生物和生命科半岛综合体育官方APP下载德甲学领域。然而,当我们考虑开发一个基于这种技术的特定应用程序,以使用它在各种环境和一系列工具,它可能为你记住这些单词;“…真相更容易出现的错误,比从混乱”——培根(1561)。
引用
- d .索伯恩烧伤,”罗伯特·博伊尔和分析光谱”的诞生,半岛综合体育官方APP下载德甲分光光度法、发光和颜色,埃德·c·伯吉斯和琼斯D.G. UVSG &球茎。爱思唯尔,阿姆斯特丹,荷兰(1995)。
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- jr Lakowicz,荧光光谱原理半岛综合体育官方APP下载德甲,2nd经济日报。Kluwer学术/充气出版商,纽约,美国(1999年)。https://doi.org/10.1007/978 - 1 - 4757 - 3061 - 6
