近年来,蛋白质组学研究使用质谱(MS)全面调查生物样本的蛋白质成分已成为非常受欢迎的。为了检测蛋白质的女士,有必要提取蛋白质组件中包含的细胞,用蛋白酶消化肽大小易于分析的蛋白质消化女士以这种方式通常需要很长的反应时间20小时或更多。表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)常用于蛋白质提取过程,干扰女士和蛋白质消化、分析之前,必须彻底删除。然而,这一过程伴随着成本,即样品损失。为了克服这些挑战,特别大学的研究人员,日本,创造性地发明了一种样品制备方法,AnExSP(阴离子交换disc-assisted顺序样品制备),它使用一个µL-sized旋转列装有阴离子交换固相萃取盘在吸管的技巧称为StageTip作为一种工具对蛋白质的消化。
他们成功地完成酶消化过程中丰富的蛋白质组件至少60分钟的圆盘表面。此外,他们建立了最佳洗脱条件只有消化肽从光盘同时保持SDS包含在光盘上的样本,与简单的操作,取得了样品预处理和最小损失。通过结合AnExSP data-independent收购(DIA) Orbitrap质谱的分析,他们成功地检测大约7000种不同的蛋白质组件1µg人类培养细胞蛋白提取。通过建立样品预处理条件使用这两款StageTip将来,AnExSP预处理可用于单细胞蛋白质组学研究,近年来越来越感兴趣。
AnExSP还可以用于蛋白质分离的预处理SDS-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page),这是常用的蛋白质实验。传统预处理方法相比,AnExSP证明性能优越,特别是在长链消化肽的检测。在这项研究中,他们用化学交联结合AnExSP和sds - page蛋白复合物的方法,并成功地简单纯化目标蛋白复合物和高效的检测长链交联肽很难用常规方法检测到。因为它的深远的多功能性,AnExSP有望应用于高度敏感的结构分析方法进行生物样品中微量蛋白复合物。
