快速评估样本核酸,蛋白质,和污染物

当你理解了你的样品数量和纯度,可以使教育决策在下游实验中使用它们。热科学NanoDrop分光光度计的家人可以帮助你快速评估样本是否包含适量的目的。根据您选择的仪器,软件也可以提醒你当污染物存在并确定它们是什么。

核酸和蛋白质量化和纯度评估的核心功能NanoDrop分光光度计,下游是不可或缺的许多应用程序,尤其是RT-qPCR和质量控制。应用,如细菌培养生长、动力学和最优化应用QC等液体聚合物也支持。在我们的总理模型,你也可以创建和共享自定义方法或从我们的网站下载它们。


核酸定量

核酸历来被确定量化分析三个波长的紫外吸光度:230 nm、260 nm和280 nm。这些允许科学家测量核酸浓度和吸光度测量样品纯度的迹象。最大吸收峰的强度在260 nm核酸浓度成正比。

这种核酸定量方法的优点是简单,直接,仅消耗样本的体积小。然而,挑战之一是缺乏特异性,任何污染物,这些波长的吸收会导致合成核酸的浓度不准确。

随着紫外可见软件的进步,研究人员现在可以选择性地量化核酸化学和吸光度核酸的污染物。热科学Acclaro情报技术软件(标准在我们的总理NanoDrop /CNanoDrop八分光光度计)使用全光谱数据和先进的算法来识别常见的核酸污染物并提供纠正核酸浓度。Acclaro算法可以检测dsDNA污染在dsDNA RNA, RNA污染。您还可以输入自定义的益生元序列和软件会自动申请核酸定量计算因素。

预编的核酸的应用程序在NanoDrop一个/一个ᶜ分光光度计

点击选择您需要的应用程序从核酸主屏幕。

量化的标记核酸

荧光标记核酸可以量化的使用微阵列预配置软件方法,提供核酸浓度以及标签(两个染料)。这种方法可以作为NanoDrop一个/一个预配置的应用程序C和NanoDrop 8仪器。


污染物识别

Acclaro情报技术允许NanoDrop一个/一个示例CNanoDrop八Microvolume分光光度计对样本质量提供更多的信息通过识别常见的污染物浓度和交付正确的样品。Acclaro软件包含算法依赖光谱库的引用。软件将这些算法应用于样品光谱,使预测样本的污染物通过最优化数学原则。

Acclaro污染物识别

Acclaro软件已经标记这个dsDNA示例(黄色图标),因为它含有苯酚。苯酚(橙色)的吸光度的贡献已经从最初的结果减去(总A260,蓝色)获得真正的,纠正dsDNA浓度样本(绿色)。

Acclaro参考图书馆目前支持检测蛋白质、酚、盐酸胍和RNA dsDNA样本。它们还支持检测蛋白质、酚、异硫氰酸胍,dsDNA RNA样本。最后,他们允许检测蛋白质的DNA样本。额外的污染物在未来将被添加到库。

污染物识别为研究人员提供了两个重要的信息。首先,它标识特定污染物可能会出现在示例。这些信息可以帮助科学家们解决困难的拔牙或方法进行了净化和做出决定关于样本用下游实验。其次,它提供了一个修正分析物的浓度。设置PCR等下游反应时,DNA浓度是一个关键参数,修正后的浓度将帮助科学家确保下游实验的成功。

例如,RNA基因组DNA中的污染准备在分子生物学工作流是一种常见的问题。在传统的分光光度法,copurified RNA的存在可以人为地抬高DNA的浓度。通过使用完整的光谱数据和多变量数学算法中可用Acclaro软件,研究人员可以识别DNA样本中RNA污染和看到修正后的DNA浓度的结果。


核酸定量RT-qPCR工作流

可靠的RT-qPCR(定量逆转录PCR)分析需求仔细的实验设计,丰富的质量控制(QC),和透明的数据分析。

核酸在RT-qPCR量化质量控制的重要性

核酸定量至关重要酶RT-qPCR过程的步骤。在逆转录步骤,了解(和正常化)RNA的数量进入反应有助于最小化可变性cDNA生产。在PCR一步,你必须确定你有足够的cDNA模板来确定样本的基因型。

MIQE guidelines-minimum信息出版定量实时PCR实验需要输入RNA数量和纯度报告使用qPCR的出版物。

使用NanoDrop分光光度计在qPCR工作流

NanoDrop一NanoDrop八分光光度计是适合量化和资格核酸样本作为下游RT-qPCR化验质量控制步骤。这些工具可以帮助防止失败或不能出版的实验通过提供精确的核酸浓度和识别污染物可能改变实验结果。

Acclaro样本智能技术,内置NanoDrop《一个和八个》工具,识别的样本中存在共同的污染物并计算出一个近似的污染物浓度。常见的分子核酸提取试剂盒可以高估分析物浓度或变性qPCR聚合酶。在这两种情况下,qPCR实验能失败。Acclaro软件提供纠正核酸浓度和识别污染物,以帮助减少故障诊断时间和管理失败的实验。


蛋白定量

科学家可以使用NanoDrop工具量化蛋白质含量的样品使用直接或间接测量。NanoDrop紫外可见分光光度计支持蛋白质样本量化与申请直接A280和A205测量紫外范围和比色分析光谱的可见范围。

预编的蛋白质应用NanoDrop上一个/一个ᶜ分光光度计

点击选择您需要的应用程序从主屏幕的蛋白质。

蛋白质A280是一个直接测量的应用计算蛋白质浓度直接基于样品吸光度在280或205海里和蛋白特异性消光系数。直接测量是一个受欢迎的选择对于研究人员,因为他们是简单的执行,不需要试剂或标准,和消费很少的样本。蛋白质与核酸不同,可以表现出相当大的多样性。蛋白质A280应用程序适合纯化蛋白质,含有残留的色氨酸(Trp)或酪氨酸(酪氨酸)半胱氨酸二硫键(Cys-Cys)和展览在280 nm吸光度。

比色分析如BCA,布拉德福德,洛瑞,和皮尔斯660海里间接测量的应用依赖的标准曲线和反应,产生颜色的变化与样品中蛋白质的含量成正比。在复杂的蛋白质混合物如细胞提取物或溶菌产物是最好的测量使用蛋白质比色测定。

研讨会:蛋白质样品评估使用NanoDrop紫外可见分光光度计

蛋白质样品评价是一个重要的步骤在许多工作流。这次研讨会的解释了NanoDrop工具简化过程,比较了不同的蛋白质化验,和评论的最佳实践准确量化的蛋白质。


选择你的蛋白质或肽的最佳量化分析样本

下面的表显示范围、描述和注意事项有关NanoDrop紫外可见分光光度计的蛋白质定量方法,以及哪些方法是提供工具。这些化验的更多信息,请参阅我们的蛋白质测定选择指南

蛋白质的方法支持NanoDrop分光光度计

方法

NanoDrop一个/一个浓度范围C

描述

注意事项

A280

  • 底座:0.06 -820毫克/毫升BSA(0.03 -400毫克/毫升免疫球蛋白)
  • 小池:0.006 - -2.38毫克/毫升BSA
  • 直接测量,快速和容易。
  • 最好方法纯蛋白质包含Trp和酪氨酸残基。
  • 使用比尔定律来计算浓度。为了得到准确的结果必须输入正确的消光系数。
  • 不需要标准曲线。
  • 当测量蛋白质混合物使用1 Abs = 1毫克/毫升“样本类型”。
  • 污染物或缓冲吸收~ 280 nm会影响蛋白质浓度的计算。
  • Acclaro样本情报技术检测核酸蛋白质样品中污染物浓度和纠正的结果。

A205

  • 不同肽肽;近似范围0.003 - -10.74毫克/毫升
  • 措施肽骨干吸光度在205海里。缩氨酸缺乏或有几个Trp和酪氨酸残基。
  • 范围可以用来测量方法选择有大量的蛋白质和酪氨酸。
  • 更敏感比A280 A205以来,摩尔吸光系数高。
  • 高盐蛋白质缓冲如PBS和TE低紫外线吸收。使用低盐缓冲像玻雷吉®缓冲稀释到0.01%。

皮尔斯660

  • 50 - 2000μg /毫升BSA(15:1试剂:样品卷)
  • 25 - 1000μg /毫升BSA(7.5: 1试剂:样品卷)
  • 最准确、快速、简单的比色测定。
  • 兼容大多数洗涤剂,减少代理和Laemmli加载缓冲区。
  • 试验在室温下完成孵化时间较短。
  • 试剂在室温下储存。
  • 需要标准曲线。标准曲线的线性范围扩大而布拉德福德。
  • 少比布拉德福德protein-to-protein变异分析。

布拉德福德

  • 100 - 8000年μg /毫升BSA(50:1试剂:样品卷)
  • 15 - 100μg /毫升BSA(1:1试剂:样品卷)
  • 措施Coomassie蓝移在595 nm绑定到蛋白质。
  • 试验在室温下进行快速和容易。
  • 线性范围100 - 1000μg /毫升BSA(50:1比率)。
  • 需要标准曲线。
  • 表面活性剂可能导致试剂降水。
  • Coomassie-dye绑定化验展品两倍protein-to-protein可变性BCA化验。

BCA

  • 200 - 8000年μg /毫升BSA(20:1试剂:样品卷)
  • 10 - 200μg /毫升BSA(1:1试剂:样品卷)
  • 措施Cu-BCA螯合物在562海里形成蛋白质的存在。
  • 通常用于稀释样品。
  • 兼容大多数表面活性剂浓度高达5%。
  • 少protein-to-protein Coomassie相比变化的方法。
  • 需要标准曲线。
  • 减少代理、铜螯合剂和高容量缓冲区会干扰测定。

洛瑞

  • 200 - 4000年μg BSA /毫升
  • 在650 nm措施sulfate-tartrate铜配合物。
  • 修改的洛瑞在750海里可以运行一个定制的方法
  • 从650 - 750纳米复合物可以测量。
  • 需要标准曲线。
  • 钾离子和洗涤剂沉淀试剂。
  • 螯合剂,减少代理和自由硫醇干扰测定。

蛋白质方法NanoDrop乐器

方法

NanoDrop一个/一个C

NanoDrop

NanoDrop Lite +

A280


A205

没有

皮尔斯660

即将到来的

没有

布拉德福德

即将到来的

没有

BCA

没有

洛瑞

即将到来的

没有

A260 / A280

Acclaro污染物识别

没有

可定制的蛋白质编辑器

没有

吸光度在280 nm快速提供蛋白质和肽量化

纯化蛋白样品可以使用直接准确测量吸光度在280纳米,这主要是由于芳香Trp和酪氨酸的氨基酸链。蛋白质A280,一个预配置的应用程序在我们的软件,是最受欢迎的量化方法,因为它是快速和简单,不需要试剂或标准曲线,消耗很少的样本。

蛋白质与核酸,每个纯有独特的Beer-Lambert消光系数基于其氨基酸序列。为了得到准确的结果,从菜单中选择正确的样本类型或手工输入其蛋白质消光系数。NanoDrop 1和NanoDrop 8蛋白编辑特性允许您保存特定蛋白质的消光系数,以便您可以定制您的样本类型选项。

除了浓度,NanoDrop分光光度计可以提供样本中的信息。Acclaro样本情报技术(包括NanoDrop /CNanoDrop八工具)使用数学算法来检测核酸蛋白质样品和正确的浓度的结果。样品纯度也可以评估通过测量其A260 / A280比率;一个值> 1可能表明核酸蛋白质样品污染。

A205是直接测量的选择,甚至对酪氨酸和tryptophan-free生物分子

如果你的蛋白质或肽缺乏Trp和酪氨酸残基,因此无法衡量使用A280应用程序?因为蛋白质的肽骨干吸收光线在190 - 220海里,缩氨酸缺乏酪氨酸或Trp残留物可以量化使用吸光度在205海里。蛋白质A205是一个预配置的应用程序在NanoDrop软件。

有大量的蛋白质和酪氨酸也可以量化使用A205应用程序通过选择范围的选择方法。事实上,A205方法有一些优势A280蛋白质等方法降低protein-to-protein可变性(因为A205消光系数并不是基于氨基酸组成)和更高的灵敏度(因为蛋白质高的摩尔吸光系数在205海里)。尽管技术上的限制使这些测量困难的过去,NanoDrop样品保存技术和低杂散光性能简化量化A205少量的蛋白质的方法。

A205方法的一个局限是,许多常用的蛋白质缓冲吸光度在205海里。在使用这项技术之前,我们建议检查蛋白质缓冲对吸光度的贡献在205海里。

比色分析蛋白质在细胞中提取或溶菌产物

蛋白质在细胞提取物等复杂的混合物或溶菌产物是最好的测量使用比色测定蛋白质如布拉德福德,BCA,洛瑞,或皮尔斯660 nm化验。这些化验提供蛋白特异性的浓度,避免从电池组件吸收紫外线吸光度范围,并将膨胀A280。这些和其他应用程序预配置选择NanoDrop仪器。

在NanoDrop BCA蛋白质测定一个/一个ᶜ分光光度计

BCA化验结果显示总蛋白浓度(3红钻石)和标准曲线。

量化的标记蛋白

标记抗体或其他荧光标记蛋白质和金属离子可以量化的使用蛋白质和标签预配置软件应用程序提供的蛋白质浓度以及标签(2染料)。这个应用程序可以作为NanoDrop一个/一个预配置的应用程序C和NanoDrop八分光光度计。


质量控制实验室

质量保证和质量控制现在比以往任何时候都更重要。在繁忙的QC实验室,NanoDrop分光光度计可以帮助分析样本浓度和纯度可再生的常规,可靠。将下一代样本质量评估集成到您的工作流的区别,因为时间是宝贵的,你所有的样品的质量是至关重要的。

信使核糖核酸疫苗质量控制

作为一个案例,在生产对抗SARS-CoV-2 mRNA vaccines-so至关重要的和越来越多的部署对其他viruses-quality检查样品的浓度和纯度是有用的在几个步骤的过程。

  • 测序阶段,起始物料的质量和数量都是准确的结果的关键。
  • 质粒的生产基因组DNA的纯化血浆必须检查和其他污染物。
  • 在体外转录之前,必须检查纯化信使rna纯度mRNA的解决方案是填充到疫苗瓶。

信使核糖核酸疫苗生产工作流程

NanoDrop一个/一个CNanoDrop八分光光度计可以作为质量控制检查点在信使核糖核酸疫苗的生产几个阶段。

查看我们的按需网络研讨会,看看NanoDrop /CNanoDrop八分光光度计可以很容易地部署这些任务。,与软件提供援助符合美国食品及药物管理局21 CFR第11部分规定,这些工具就可以实现到mRNA疫苗工作流GMP的实验室。

研讨会:信使核糖核酸疫苗:开发、制造、NanoDrop八如何帮助

本研讨会简要讨论mRNA疫苗历史和工作流和检查如何NanoDrop分光光度计可以帮助研究人员和生产工程师评估核酸浓度和纯度而遵守21 CFR第11部分规定。


合规在制药、生物技术和其他监管环境

我们信赖,国务院总理NanoDrop /CNanoDrop八分光光度计可以用于制药和生物技术等监管环境。这些模型可以帮助你量化和资格DNA, RNA和蛋白质的样品只有1 - 2µL秒,获得全光谱数据确认样品合格的下游应用程序。

此外,可选热科学安全套件或热科学SciVault软件可以帮助你的实验室保持符合美国食品及药物管理局数据规定在漫漫长路的每一步。这些软件模块使美国食品及药物管理局监管符合第11部分的标题21联邦法规有关代码的电子记录和签名(21 CFR部分11)。

以下部分显示选择特性的安全套件软件NanoDrop /C分光光度计、包括用户帐户访问审计跟踪功能,电子签名,自动数据备份等等。SciVault NanoDrop 8仪器软件提供了类似的功能。

如何安全套件软件符合美国FDA标题21 CFR第11部分的要求吗

要求:限制系统访问授权的个人。

特点:通过安全套件软件管理员授权访问。用户帐户访问是通过Windows登录管理系统。

要求:签署电子记录打印名字,日期和时间戳,签名的意义。

特点:实验完成后立即签署。用户可以修改、审查和批准实验从历史页面。

要求:安全、电脑、带时间戳的审计跟踪记录操作员操作和条目。

特点:审计经理创建了一个电子审计跟踪行为,如登录、数据创建、签名等。审计日志是可用的。

药品合规研讨会

制造商面临的不断变化的监管环境在制药和其他合规监管的行业可能会导致混乱和怀疑。仪器系统设计,以满足监管要求制造商可以减轻负担。他们是怎么做到的?观看我们的研讨会在保持合规制药QA / QC实验室看到两个不同的仪器平台上,那些时光峰会热科学Nicolet FTIR光谱仪(原料和成品材料QA / QC)和NanoDrop分光光度计(DNA、RNA和蛋白质量化),帮助实验室保证合规流程。

研讨会:维护制药公司合规QA / QC实验室

学习新的软件工具使制药公司执行高度精确的QA测试,同时确保药物开发过程中数据的完整性。


细菌培养增长(OD600)

细菌培养的增长可以通过测量监控光密度在600 nm (OD600年)。虽然这是微生物学的一个核心技术,这些光密度测量通常包含很少真正的化学吸光度。相反,他们代表的光线分散远离细菌悬液仪器的检测器。

你可以测量OD600年在NanoDrop /CNanoDrop八分光光度计使用OD600预排程序的应用程序。朗伯-比耳方程成立软件使用和用户输入的手机号转换因子自动转换OD600年值到细胞的数量每毫升。

注意,在NanoDropC仪器、基座和试管选项将不同OD600年值。您可以使用一个转换因子比较基座和电池之间测量。


基于时间的动态测量

NanoDrop一C乐器,你可以基于时间的动态测量样品比色皿。你可以指定三波长190 - 850纳米连续吸光度在用户定义的监控间隔5阶段。低电池测量提供了一个扩展检测限制和一个可选37°C加热器和micro-stirrer。

您可以创建、编辑和保存动力学实验作为自定义方法。

样本动力学结果

这对NanoDrop试管样本测试C吸光度在260、340和660海里在用户定义的时间间隔10分钟。


自定义方法NanoDrop分光光度计

NanoDrop分光光度计有预装核酸定量的方法(如dsDNA、ssDNA和RNA)和蛋白质量化(如A280, BCA,和布拉德福德)在上面的部分中所述。您还可以创建自定义方法在NanoDrop /C或NanoDrop 8执行紫外可见分光光度计或其他用户定义的测量来满足您的需求,使仪器函数作为一个传统的分光光度计。自定义方法可以监视和报告40波长190 - 850纳米,可以设置直接从触摸屏或电脑控制软件。自定义方法提供额外的应用程序使用你的仪器的灵活性。

  • 使用预定义的自定义方法分析样品,如纳米颗粒,叶绿素,通过BCA化验血红蛋白、葡萄糖和蛋白质。
  • 创建新的自定义方法来分析您的特殊样品并保存以供将来使用的方法。

使用一个自定义的方法测量形式的血红蛋白

作为一个案例,一个分光光度计可以用来量化各种形式的血红蛋白使用适当的消光系数和最大吸光度值。

  • 氧合血红蛋白包含绑定氧气和展品吸光度的峰值在414海里,541 nm和576 nm。
  • 脱氧血红蛋白不包含绑定氧气和展品431海里的吸收峰。
  • 高铁血红蛋白不能绑定氧气由于含铁的铁州和展品406海里的吸收峰。

我们创建了一个自定义方法NanoDrop /C仪器测量血红蛋白的吸光度在406年,414年,431年,541年和576年的第五波长需要区分氧合血红蛋白,还原血红蛋白,高铁血红蛋白。这个结果图显示了一个典型的吸光度光谱高铁血红蛋白。

典型的吸光度光谱高铁血红蛋白

血红蛋白的自定义方法在NanoDrop上运行一个分光光度计显示了一个高峰在406 nm,典型的高铁血红蛋白。光谱也缺乏在541年和576年达到顶峰,在氧合血红蛋白存在。


最优化方法

化学计量学是使用多变量数学模型和统计技术确定定量浓度信息的同时许多组件。当用来分析常用的数据从复杂的化学样品(混合物),化学计量学可以提供一个强大的方法来确定重叠光谱的化学物种的浓度。从历史上看,其多元校正模型的复杂性限制其使用那些深的知识领域,所以大部分数据必须传输一位经验丰富的化学计量学专家进行主要分析。

NanoDrop QC软件带来的化学计量学

热科学NanoDrop质量控制软件带来强大的最优化分析NanoDropCmicrovolume测量平台。这种组合是广泛应用的一个有吸引力的解决方案包括石油化工分析、药物纯度,聚合物制造、食品染料的应用程序,和更多的应用最优化分析是必需的。

NanoDrop QC软件简化和简化了最优化方法的开发和部署。科学家开发方法可以收集化合物的光谱选择并将它们导入热科学TQ分析师软件构建方法。方法可以直接部署NanoDropC紫外可见分光光度计在世界各地,使质量控制技术人员实现通过/失败和其他定量结果在工厂地板上。

化学计量学QC液体聚合物

Cuvette-based紫外吸收技术和基于pc的最优化软件质量分析的主食液体如染料、润滑剂和粘合剂。这些解决方案的样品制备和分析可能包括多个耗时的过程影响高价值产品的释放。我们的创新,auto-ranging基座紫外可见分光光度计可以消除耗时的步骤如高度集中样本的稀释和简化了最优化方法开发数据分析。

用数量来表示复杂的混合物,尽管重叠光谱

在我们的化学计量学应用程序中,我们将演示一种循序渐进的方法来创建和验证一个最优化方法,它决定了个体的偶氮染料的浓度在一个复杂的混合物。我们展示NanoDrop QC软件可以用来获取定量信息样本中,有多个组件高度重叠的紫外可见光谱。

完整的紫外可见光谱纯柠檬黄和日落黄色(200 - 700海里)

与紫外可见光谱采集模块NanoDrop QC软件和基线修正为800 nm。每个染料的解决方案准备在10毫克/毫升,2-µL整除测量仪器。

教育:NanoDrop分光光度计在教室里

获得真实的仪器是准备的关键和激励下一代的科学家。实践经验使科学更加平易近人和科学原则更令人难忘。

特别是,紫外可见光谱是一个有价值的工具,用于半岛综合体育官方APP下载德甲研究蛋白质和核酸等大分子生物学课堂。NanoDrop工具的简单性和负担能力使其非常适用于本科生,甚至中学科学课程。经验NanoDrop分光光度计可以支持课程在基因组学、免疫学、微生物细胞生长,酶动力学,结构和功能的基本组件的生活。

这次研讨会的文档有两个高中教师综合NanoDrop一分光光度计课程和研讨会。

研讨会:NanoDrop创新和教室:激励下一代的科学家

获得最新的技术可以使今天的教育完全不同的两个世界。听到学校老师是如何将NanoDrop工具集成到他们的教室和实验室,为学生提供学习的机会在行业领先的技术。


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