LSM升级套件

共焦激光扫描显微镜(lsm)是广泛使用的工具在生物化学,细胞生物学,和其他相关生命科学。这些显微镜,可以进一步增强的能力通过时间分辨技术,给予以下优点:

• 一生中烦恼担心定量测量的效率
• 时间分辨成像揭示了环境参数如离子浓度和pH值
• 一生中从荧光团浓度测量是独立的
• 分离的分子光谱重叠排放量终生指纹
• 减少需要的探测器,探测器的数量足以同时检测不同的荧光团根据他们特定的一生的模式匹配
• 歧视的荧光光弹性和拉曼散射和其他背景贡献时间分辨率
• 衰减时间作为进一步参数提高分析测量的准确性

升级工具包是一个外部LSM和赠款易于使用,多才多艺,舒适性能没有耗时的调整。交钥匙设置包括三个主要部分:微微秒脉冲激励,单分子敏感的检测和Time-Correlated单光子计数(TCSPC)数据采集。

灵活的励磁系统

可以检查所有样本包含常用的荧光团LSM升级装备。为了这个目的,激发子系统由一个脉冲二极管激光驱动的PDL系列和不同的激光的头与皮秒脉冲时间政权(额外的CW模式可以作为一个选项)。

可用波长范围从375到900纳米。激光头集成在多个光学组件在一个激光结合单位(LCU)舒适的处理和耦合到光纤使单一或多色激发。样本背景是显著降低狭窄的激发光谱的激光。

重复率和激光功率可以通过激光调整司机的荧光寿命减少漂白的样本。代替脉冲二极管激光器,尤其是对多光子激发计划,短脉冲激光系统,如:钛蓝宝石激光器可以集成。

优秀的与皮秒时间分辨率

荧光寿命下降几个皮秒甚至到毫秒的磷光发光研究很容易可解析LSM升级装备。这个广泛的测量范围涵盖几乎所有的样本都是在生活中以及材料科学分析。时间分辨显微镜不仅需要登记的光子本身,但也在时间和他们的立场,成像,空间。理想的技术,目的是Time-Tagged时间分辨(TTTR)PicoQuant开发的数据采集,这是一个变化的经典方法Time-Correlated单光子计数(TCSPC)。使用TTTR数据采集截然不同的测量过程,如这部电影,基于一生烦恼,FCS,甚至巧合的相关性(“antibunching”)可以执行,基于一个基本的数据格式。TTTR格式是由所有可用的支持TCSPC电子从PicoQuant。用八个不同的模块独立TCSPC渠道快速、并行检测可以提供最高的数据吞吐量,multi-stop可能性,和低收购死时间,实现短时间。

单光子敏感检测灵敏度最高

确保最优的实验条件,四个不同的探测器类型可供LSM升级包:

• 混合PMT这部电影最好的全能球员,FCS, NDD深层组织成像
• PDM SPAD,这部电影和FCS的最快的探测器
• SPCM-AQRH SPAD,最高灵敏度检测器对FCS最好
• 光电倍增管(pmt) PMA系列,这部电影的经济变量

混合pmt和发表所需提供最高灵敏度,适合单分子实验,例如,手机电影和FCS研究在低荧光强度。探测器的效率,不同时间分辨率、光谱范围,或活跃的区域。因此,探测器的选择取决于几个因素,如目标应用程序或接口为共焦显微镜或NDD (non-descanned)检测。

更多…

直观的软件

系统软件SymPhoTime 64提供了多个易于使用的所有类型的样品采集和分析工具。基于先进的数据采集和处理、系统软件SymPhoTime 64支持多种方法,如荧光寿命成像(这部电影),福斯特共振能量转移(FRET),荧光相关光谱(FCS)半岛综合体育官方APP下载德甲、荧光寿命关联能谱法(方法)半岛综合体育官方APP下载德甲,强度时间跟踪,破裂分析、生命周期直方图,各向异性,只有少数。
SymPhoTime 64数据处理维护一个透明的数据结构,所有派生数据都存储在一个工作区,包括日志文件来跟踪所有测量和分析步骤。图像数据可以进一步处理或出口标准格式。大量的算法,这些方法已经集成在软件,提供了一个分析平台,待发表的数据。同时,SymPhoTime 64提供了增强的灵活性为一体的小说,由用户前沿的算法。专门的脚本语言接口允许修改和扩展分析程序根据实验的需要。
专门研制的64和LSM SymPhoTime软件之间的接口(尼康和徕卡)强烈促进数据采集,使简单的记录,例如,电影的4096×4096像素,图像时间序列这部电影,z-stacks以及单一和FCS的多点测量。在线预览的主要参数(这部电影快,FCS、time-traces或TCSPC直方图)允许快速优化数据采集。

我们的互动用户论坛为新的和高级用户提供出色的支持。

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支持lsm

励磁系统	微微秒激光二极管与可调输出功率和重复率高达80 MHz内一个紧凑型激光单元 波长在375到900纳米之间 单个或多通道激光驱动程序 可选:外部激光(例如:钛蓝宝石激光器) 新:560海里微微秒脉冲激发的ldh - d - ta - 560
支持lsm	尼康:AX, A1, C2 + C2, C1si 奥林巴斯:FluoView FV3000、FVMPE-RS FluoView FV1200 (MPE) FluoView FV1000 (MPE) Scientifica: VivoScope HyperScope 880年蔡司:LSM 980, LSM LSM 780, LSM 710
检测	四个平行检测通道 Descanned或non-descanned配置 通过光纤LSM的连接
探测器	Hybrid-Photomultiplier管 单光子雪崩二极管 光电倍增管
数据采集	基于的方法Time-Correlated单光子计数(TCSPC)独特Time-Tagged时间分辨(TTTR)测量模式 四通道同步数据采集
软件	SymPhoTime 64

所有信息给我们最好的知识是可靠的。然而,任何可能出现的错误或遗漏承担责任。规格和外观如有变更,恕不另行通知。

• 激发波长:375 nm - 900 nm
• 平行附件PicoQuant和迈普激光的脉冲激光器(尼康A1)
• 同时从PicoQuant和连续波激光脉冲激光器的使用尼康A1
• incoupling专用光纤开关的脉冲激光器(尼康C系列)
• 附件PicoQuant探测器LSM的特别出口(尼康A1)
• 选择耦合PicoQuant探测器和尼康´s光谱检测单元(尼康C1si C2)或尼康´s PMT检测单元(尼康C1, C2)
• 平行设置共焦和NDD成像以及极化测量(尼康A1)
• SymPhoTime LSM NIS 64集成到软件促进电影和FCS数据采集
• 数据分析使用强大的SymPhoTime 64软件
• 完全控制PicoQuant脉冲激光在NIS元素,使高电影的内容筛选使用工作

详情请查看选择图表尼康A1,C1si和C2 +,C1和C2。

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• 激发波长:405 - 900 (FV3000)和375 - 900 nm (FV1200 / FV1000)
• 同时使用脉冲激光PicoQuant和连续波激光从奥林巴斯,独立的激发波长
• 使用脉冲激光与正常或SIM扫描仪
• 附件PicoQuant探测器LSM的特别出口
• 平行设置为共焦和NDD成像(FV1000MPE FV1200MPE)以及极化测量
• 数据分析使用强大的SymPhoTime 64软件
• 使用的四个内部NDD pmt的深层这部电影(FV1000MPE FV1200MPE)

详情请查看选择图表FluoView FV3000,FluoView FV1000 (MPE) / FV1200 (MPE),和FVMPE-RS。

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• 迈普激光的使用
• 使用四个内部NDD探测器的深层这部电影
• 使用标准NDD PicoQuant单光子探测器的成像
• 基于平行设置为这部电影和强度NDD成像
• SymPhoTime 64融入ScanImage软件VidrioTechnologies促进电影的数据采集
• 数据分析使用强大的SymPhoTime 64软件

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• 激发波长:405 nm - 640 nm
• 并行连接的脉冲激光器PicoQuant和蔡司
• 平行附件PicoQuant和迈普激光的激光脉冲力
• 附件PicoQuant探测器LSM的特别出口
• 同时耦合PicoQuant探测器和ConfoCor单位710年(LSM)
• NDD结合NLO直立和逆显微镜
• 单一以及双通道NDD (LSM 710 NLO / LSM 780 NLO)
• 平行设置共焦和NDD成像以及极化测量
• 数据分析使用强大的SymPhoTime 64软件
• SymPhoTime 64融入LSM禅宗软件促进电影和FCS数据采集

详情请查看选择图表蔡司LSM 710/780/880/980。

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• 激发波长:405 nm、440 nm、470 nm和640 nm (TCS SP5 / SP8)
• 同时使用脉冲激光PicoQuant和连续波激光徕卡
• 平行的附件从PicoQuant和迈普激光脉冲波长405纳米的激光

对机械刺激细胞内钙离子信号

细胞内钙^{2 +}机械刺激引起的信号与Oregon-Green-Bapta-1 HEK-cells加载。在这个视频中,细胞成像之前,期间和之后mechincal刺激的前两个单元。机械刺激导致细胞中钙离子的吸收。Ca2 +浓度的增加导致OGB-1荧光寿命的变化,和前两个细胞点亮绿色很短的一段时间。的rapidFLIM^员工方法使成像样品面积128 x 128像素5电影帧每秒的速度,这使得它可以定量观察细胞中钙离子浓度的上升在短的时间内。

样品的细节:

• 人类胚胎肾细胞(HEK)装载Oregon-Green-Bapta-1 (OGB-1点)在人工脑脊液

设置:

• 128 x 128像素,3.81µs像素停留时间
• 每秒5帧

样本和数据由教授罗斯(神经生物学研究所海因里希海涅大学杜塞尔多夫,德国)

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监控与rapidFLIM膜张力的变化^员工

这段视频显示了MDCK细胞的膜与荧光探针FliptR染色^®(荧光脂质张量的记者)。这个调查显示显著改变荧光寿命,当嵌入在一个封闭的环境。如果应用侧压力,FliptR^®将进行整平导致荧光寿命的变化,这使得成像脂质成分和膜张力活细胞和人工膜。

在等渗的条件下,FliptR展览5.1 ns的荧光寿命。诱导一个高渗的冲击后,观察到膜张力迅速减少,更短的寿命。成像的rapidFLIM^员工方法是足够快的速度,这一生变化和通过扩展膜张力的变化可以实时记录。

样品的细节:

• Madin-Darby狗肾细胞(MDCK),膜沾FliptR^®

设置:

• 激励:485海里
• 图像大小:512 x 256像素
• 1.0帧/ secondd

样品由科罗姆,瑞士日内瓦大学

参考:科罗姆。Derivery E。,Soleimanpour, S. et al. A fluorescent membrane tension probe. Nature Chem 10, 1118–1125 (2018). https://doi.org/10.1038/s41557-018-0127-3

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rapidFLIM——重新定义标准动态电影成像

rapidFLIM测量启用动态成像的荧光寿命。这种新方法允许快速电影的收购与几个帧每秒的速度以及成像的动态过程(例如,蛋白质相互作用、化学反应或离子通量),高度移动的物种(如细胞细胞器或粒子的迁移,细胞迁移),和调查烦恼动力学。可以获得超过10帧每秒,根据样品的亮度和图像大小。

单膜囊泡可以产生一个大小政权从巨人(老爸)到大型(乐芙适),甚至小(suv)。弹性膜成分和可能性引入专门标记脂质增加单膜囊泡在细胞生物学研究的重要性。因此把这种囊泡一个非常强大的模型来研究如膜域形成以及脂质膜micro-domains组织。

直到现在,获取电影的图片花了几分钟,由于老爸的机动性高,成像准确是很困难的。应用rapidFLIM方法显著降低了采集时间,允许记录几帧/秒。因此即使高度移动的老爸可以精确地跟踪。在这个例子中,两个荧光团标记脂质(C6-NBD-PC和N-Rhd-DOPE)被纳入老爸。NBD non-phase老爸分开,一生(7-nitrobenz-2-oxa-1 3-diazol-4-yl)强烈淬火(下来~ 2 ns)由于受主罗丹明烦恼。录制的视频所示包含300帧的帧速率为5.6 fps。

样品的细节:

• 老爸和NBD Rhodamin标记脂质(无相分离):DOPC + 0.5 mol % Palmitoyl-C6-NBD-PC + 0.5 mol % N-Rhd-DOPE
• NBD融合Palmitoyl-C6-NBD-PC(磷脂酰胆碱)
• 若丹明融合N-Rhd-DOPE (Di-oleyl-phosphatidyl-ethanolamin)

设置:

• 激励:485 nm, 40 MHz
• 长通滤波器:488海里
• 75 x 75µm 300 x 300像素,1µs /像素
• 300帧为5.6 fps

伊凡Haralampiev老爸准备,实验室的分子生物物理学,柏林洪堡大学祖茂堂

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脂质顺序使用荧光寿命测定

这部电影测量方便有序和无序膜阶段之间的分化。膜染料Laurdan和di-4-ANEPPDHQ膜可用于图像顺序由于荧光发射的光谱蓝移,以及一生liquid-ordered和liquid-disordered阶段之间的转变。这些图像通常采用归一化强度比值图像的形式被称为广义极化(GP)的阴谋。这里,已知的激发态照片通过Time-Correlated物理学是利用单光子计数(TCSPC)来演示GP对比度增强这两个探测器。图像显示了GP Laurdan彩色的阴谋,固定BAEC细胞结合了一生和光谱变化。等离子体膜在细胞表面展示了高阶(红色)内细胞相比隔间(蓝色)。

设置:

• 结合MicroTime 200和LSM升级套件(徕卡TCS SP5)
• 激励:双光子激发在800 nm, SpectraPhysics媚态鸡尾酒
• 分析:SymPhoTime

由凯瑟琳高斯、血管研究中心、新南威尔士大学、悉尼,澳大利亚

参考:欧文et al ., Microsc。研究》科技,73 (6),(2010)

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紧凑的电影和FCS升级套件使多个时间分辨激光扫描显微镜的应用程序(lsm),如:

• 时间分辨荧光
• 新- - - - - -rapidFLIM^员工——重新定义标准动态电影成像
• 荧光寿命成像(这部电影)
• 磷光寿命成像(膨胀)
• 荧光相关光谱(FCS)半岛综合体育官方APP下载德甲
• 荧光寿命关联能谱法(方法)半岛综合体育官方APP下载德甲
• 荧光互相关谱(fcc)半岛综合体育官方APP下载德甲
• 福斯特把共振能量转移(FRET)
• 脉冲交错励磁(派)
• 激光切割/烧蚀
• 模式匹配分析
• 时间分辨光致发光(TRPL)
• TRPL成像
• Antibunching
• 各向异性

下列文件可以下载:

• 小册子LSM升级套件
• 选择尼康AX的图表
• 选择图表尼康A1
• 选择图表尼康C1
• 选择图表为尼康C1si和C2路激光合路器
• 选择图表与LUN尼康C2 +激光合路器
• 选择图表,奥林巴斯FV1000 FV1200
• 奥林巴斯FV3000选择图表
• 奥林巴斯FVMPE-RS选择图表
• 蔡司LSM 710/780/880/980选择图表
• NIS-Elements PicoQuant这部电影& FCS软件控制插件
• 海报:快速参考时间分辨共聚焦显微镜(电影、烦恼、FCS)
• 荧光显微技术实用手册

报告(PDF文件)

• 荧光寿命关联能谱法(方法)半岛综合体育官方APP下载德甲

相关技术和应用程序指出:

• 技术注:脉冲和连续波激光奥林巴斯LSM
• 技术注:这部电影NDD升级装备的奥林巴斯FluoView FV1000MPE
• 技术注:极化扩展单元LSM升级包
• 技术说明:使用脉冲激光在奥林巴斯FluoView ROI扫描
• 技术注:Time-Correlated单光子计数(TCSPC)
• 注意:应用荧光寿命成像(这部电影)在共焦显微镜
• 应用注:使用FLIM-FRET成像的分子的距离
• 应用注:烦恼分析Pulsed-Interleaved励磁(派)
• 应用注:Time-gated Spectoscopy荧光相关
• 注意:应用荧光寿命关联能谱法(方法)半岛综合体育官方APP下载德甲
• 技术注:磷光寿命成像显微镜(膨胀)测量-实际的方面
• 注意:应用可视化与rapidFLIM动态过程^员工,超快速电影成像方法和杰出的时间分辨率